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酶标仪的检测原理
发布时间:2018-05-25

  酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计。

  单通道自动进样的酶标仪工作原理图

  图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透 过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应 的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理 和计算,***后由显示器和打印机显示结果.

  光是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光,400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。

  检测单位:

  光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

  检测单位用OD值表示,OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:

  E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,Ι0为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。

  OD值由下述公式计算:

  E=OD=C×D×E

  C为检测物的浓度

  D为检测物的厚度

  E为摩尔因子

  在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收***多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。

  但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

  Anthos 酶标仪检测值计算

  仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量,转换成二进位数字信号,为4095。仪器定义没有光源下的透光值为0%,没有检测物的透光值为100%。则实际检测中,检测物的透光值均在0%~100%之间。透光值的计算如下:

  T=(Meas-Min)/(Max-Min)

  其中T为透光值,Meas为检测的二进位数值,Min为在0%的情况下检测的二进位数值,Max为在100%的情况下检测的二进位数值,举例如下:

  Max=3600 Mn=20 Meas=30

  T=(30-20)/3600-20)=0.0028

  OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552

  Anthos酶标仪的中心定位

  仪器会自动对酶标孔进行中心定位,中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时,仪器其实要进行35个点的测量,选取***中间的5个点的均值为本孔的OD值。

  光源的参照通道

  参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。

  酶标仪的用途和其它提示

  用于ELISA试剂的测定,广泛用于各种实验室,包括临床实验室。

  质量控制

  质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。

  空白校正

  有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气,其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的,请按照试剂盒的说明书要求进行。

  检测结果的解释

  由于有相当多的因素会影响检测的结果,如不同的酶标板,检测试剂的体积,都会造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。